凝膠滲透色譜儀是一種基于分子尺寸大小差異對(duì)高分子化合物進(jìn)行分離與分析的液相色譜技術(shù)。它廣泛應(yīng)用于聚合物、蛋白質(zhì)、多糖等大分子物質(zhì)的分子量分布、平均分子量（如數(shù)均分子量Mn、重均分子量Mw）及支化度等關(guān)鍵參數(shù)的測(cè)定，在高分子材料、制藥、生物技術(shù)、化工研發(fā)和質(zhì)量控制等領(lǐng)域具有重要價(jià)值。

　　其工作原理是利用多孔凝膠填料作為固定相，當(dāng)樣品溶液隨流動(dòng)相（通常為四氫呋喃、水或其他溶劑）流經(jīng)色譜柱時(shí)，不同尺寸的分子因進(jìn)入或被排除出凝膠孔洞的程度不同而實(shí)現(xiàn)分離：大分子無(wú)法進(jìn)入孔內(nèi)，路徑短，先被洗脫；小分子可深入孔隙，路徑長(zhǎng)，后被洗脫。通過(guò)檢測(cè)器（如示差折光檢測(cè)器RID、紫外檢測(cè)器UV、粘度檢測(cè)器或多角度激光光散射MALS）記錄洗脫信號(hào)，并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線或絕對(duì)檢測(cè)方法，即可精確計(jì)算出樣品的分子量及其分布。

　　凝膠滲透色譜儀的操作步驟：

　　一、開機(jī)預(yù)熱與系統(tǒng)檢查

　　開啟設(shè)備電源：依次打開穩(wěn)壓器、電腦、檢測(cè)器、主機(jī)及柱溫箱的開關(guān)，確保設(shè)備各部件通電正常。

　　啟動(dòng)操作軟件：登錄專用軟件（如Empower或Breeze），輸入用戶名和密碼后進(jìn)入系統(tǒng)界面。

　　系統(tǒng)初始化與預(yù)熱：?jiǎn)?dòng)泵系統(tǒng)使流動(dòng)相循環(huán)，通過(guò)軟件設(shè)置泵流速（如0.2mL/min）并緩慢增加至目標(biāo)值（如1mL/min），同時(shí)調(diào)節(jié)柱溫箱至設(shè)定溫度（如40℃）。預(yù)熱時(shí)間需根據(jù)設(shè)備要求調(diào)整，通常為30分鐘至數(shù)小時(shí)，直至基線穩(wěn)定。

　　二、樣品與流動(dòng)相準(zhǔn)備

　　溶劑選擇與處理：

　　根據(jù)樣品性質(zhì)選擇溶劑（如THF、DMF），確保其能溶解樣品且不腐蝕儀器部件。

　　使用真空抽濾系統(tǒng)對(duì)溶劑進(jìn)行過(guò)濾和脫氣處理，防止雜質(zhì)堵塞色譜柱或產(chǎn)生氣泡影響檢測(cè)。

　　樣品配制與溶解：

　　稱取適量樣品（如5-10mg）溶于溶劑中，配制成濃度適宜的溶液（如0.1%-1%）。

　　充分溶解樣品（如室溫靜置過(guò)夜或輕微搖動(dòng)），避免劇烈攪拌導(dǎo)致樣品降解。

　　樣品過(guò)濾：

　　使用一次性微孔濾膜（如0.22μm或0.45μm）對(duì)樣品溶液進(jìn)行過(guò)濾，去除不溶物和雜質(zhì)。

　　準(zhǔn)備兩個(gè)樣品瓶（分別用于溶解和過(guò)濾后溶液）及兩個(gè)注射器（分別用于過(guò)濾和進(jìn)樣）。

　　三、儀器參數(shù)設(shè)置

　　流動(dòng)相流速設(shè)定：在軟件中設(shè)置泵流速（如1mL/min），并設(shè)置變化時(shí)間（如2min）使流速緩慢增加，避免壓力突變損壞色譜柱。

　　柱溫調(diào)節(jié)：通過(guò)柱溫箱面板或軟件設(shè)置目標(biāo)溫度（如40℃），確保溫度穩(wěn)定后再進(jìn)行后續(xù)操作。

　　檢測(cè)器參數(shù)配置：根據(jù)檢測(cè)器類型（如示差折光檢測(cè)器）設(shè)置靈敏度、衰減等參數(shù)，確保檢測(cè)信號(hào)穩(wěn)定。

　　進(jìn)樣體積與時(shí)間設(shè)定：在軟件中選擇進(jìn)樣功能（如寬分布進(jìn)樣），設(shè)置進(jìn)樣體積（如20μL）和樣品測(cè)試時(shí)間（如45min）。

　　四、進(jìn)樣與數(shù)據(jù)采集

　　手動(dòng)進(jìn)樣操作：

　　使用潤(rùn)洗后的注射器抽取過(guò)濾后的樣品溶液，排出氣泡后將針頭插入進(jìn)樣口。

　　迅速將進(jìn)樣閥門撥至Inject位置注入樣品，隨后撥回Load位置完成進(jìn)樣。

　　自動(dòng)進(jìn)樣操作（如配備自動(dòng)進(jìn)樣器）：

　　在軟件中設(shè)置進(jìn)樣體積、速度等參數(shù)，將樣品溶液放入自動(dòng)進(jìn)樣器樣品盤。

　　啟動(dòng)自動(dòng)進(jìn)樣程序，儀器將自動(dòng)完成進(jìn)樣操作。

　　數(shù)據(jù)采集與監(jiān)控：

　　樣品進(jìn)入色譜柱后，檢測(cè)器實(shí)時(shí)檢測(cè)各組分濃度變化并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。

　　通過(guò)軟件監(jiān)控基線穩(wěn)定性，確保數(shù)據(jù)采集前基線平穩(wěn)。

　　五、數(shù)據(jù)處理與結(jié)果分析

　　數(shù)據(jù)查詢與處理：

　　在軟件中查詢采集到的數(shù)據(jù)，選擇待處理的樣品文件。

　　調(diào)用處理方法（如最新工作曲線），設(shè)置處理參數(shù)（如積分區(qū)域）后執(zhí)行處理操作。

　　結(jié)果查看與導(dǎo)出：

　　查看樣品的分子量、分子量分布指數(shù)及分布圖等結(jié)果。

　　根據(jù)需要復(fù)制GPC曲線或?qū)С鰯?shù)據(jù)（如TXT格式）進(jìn)行進(jìn)一步分析。

　　六、關(guān)機(jī)與維護(hù)

　　清洗色譜柱與系統(tǒng)：

　　分析結(jié)束后，用流動(dòng)相沖洗色譜柱和系統(tǒng)至少30分鐘，去除殘留樣品和雜質(zhì)。

　　沖洗檢測(cè)器流路（如切換至Purge流路沖洗樣品池和參比池），確保無(wú)氣泡殘留。

　　關(guān)閉設(shè)備電源：

　　依次關(guān)閉泵、柱溫箱、檢測(cè)器及電腦等設(shè)備電源。

　　關(guān)閉穩(wěn)壓器電源，確保設(shè)備完q斷電。

　　設(shè)備清潔與維護(hù)：

　　清潔儀器外殼和操作臺(tái)面，保持設(shè)備整潔。

　　定期檢查并更換易損件（如濾膜、密封圈等），確保設(shè)備長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行。