丁基疏水色譜柱是一種基于疏水相互作用原理設(shè)計(jì)的液相色譜柱，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、多肽、抗體等生物大分子的分離純化。其核心在于固定相表面鍵合的丁基基團(tuán)，這種短鏈烷基（C4）提供了適中的疏水性，既能有效吸附目標(biāo)分子，又避免因疏水性過強(qiáng)導(dǎo)致分子變性或難以洗脫。該色譜柱通常以硅膠或聚合物為基質(zhì)，表面鍵合丁基基團(tuán)形成疏水層。填料粒徑較小（如2.5μm或5μm），孔徑分布均勻，確保高分離效率和分辨率。

　　丁基疏水色譜柱的安裝步驟：

　　1、沖洗系統(tǒng)管路

　　斷開色譜柱與系統(tǒng)的連接，用實(shí)驗(yàn)所用的起始流動(dòng)相（與色譜柱保存溶劑兼容的緩沖液，如含低鹽濃度的磷酸緩沖液）沖洗輸液泵至檢測(cè)器的管路，流速1-2 mL/min，持續(xù)5-10分鐘，目的是排除管路中的氣泡、殘留雜質(zhì)或前次實(shí)驗(yàn)的緩沖液，避免污染色譜柱。

　　2、排氣泡處理

　　若流動(dòng)相或管路中存在氣泡，需打開泵的排氣閥（purge閥），以3-5 mL/min的流速排氣，直至流出液無(wú)氣泡（觀察管路中無(wú)明顯氣泡涌動(dòng)），關(guān)閉排氣閥。

　　3、連接色譜柱

　　確認(rèn)方向：色譜柱上標(biāo)有流動(dòng)相的流向（通常為“IN”→“OUT”，即從進(jìn)樣端到檢測(cè)器端），務(wù)必按方向連接，不可反向安裝（反向會(huì)導(dǎo)致柱效顯著下降）。

　　低死體積連接：

　　用手?jǐn)Q緊色譜柱入口端（IN）與系統(tǒng)出口管路的接頭，確保對(duì)準(zhǔn)中心，避免過度用力導(dǎo)致螺紋損壞。

　　用扳手輕輕加固（通常擰緊1/4圈即可），防止漏液（注意：不同儀器接頭規(guī)格可能不同，需匹配合適的ferrule，如PEEK材質(zhì)適合低壓系統(tǒng)，不銹鋼材質(zhì)適合高壓系統(tǒng)）。

　　同樣方法連接色譜柱出口端（OUT）與檢測(cè)器入口管路，確保連接緊密，無(wú)死體積（死體積過大會(huì)導(dǎo)致峰展寬）。

　　4、柱平衡（關(guān)鍵步驟）

　　打開輸液泵，以低流速（如0.2-0.5 mL/min）啟動(dòng)流動(dòng)相，讓流動(dòng)相緩慢進(jìn)入色譜柱，持續(xù)5-10分鐘，目的是避免突然的壓力沖擊損壞固定相顆粒。

　　逐漸提高流速至實(shí)驗(yàn)所需流速（如1 mL/min），繼續(xù)平衡色譜柱，平衡時(shí)間根據(jù)柱長(zhǎng)和流動(dòng)相性質(zhì)而定，通常需30-60分鐘（或直至檢測(cè)器基線平穩(wěn)，如紫外檢測(cè)器基線波動(dòng)≤0.1 mAU）。

　　平衡過程中，密切關(guān)注系統(tǒng)壓力，正常情況下，新柱的壓力應(yīng)低于制造商標(biāo)注的最大耐受壓力（通常HIC柱最大耐壓為10-20 MPa），若壓力異常升高（如超過最大壓力的80%），需立即停機(jī)檢查，排除管路堵塞或連接不當(dāng)問題。